Estudio Comparativo Biomolecular de Cepas de Histoplasma capsulatum Aisladas en México de Pacientes con SIDA*



La histoplasmosis es la micosis sistémica de mayor trascendencia en el mundo. En México, su importancia resalta por el alto índice de letalidad observado en la forma clínica pulmonar primaria, generalmente asociada a brotes epidémicos, por su relación cercana con ciertas actividades laborales que aumentan el riesgo de cursar la enfermedad y por su frecuente asociación con el SIDA.

Los reportes de la enfermedad en el país se iniciaron en la década de los cuarentas, aunque existen datos que remontan la probable descripción de la enfermedad al siglo pasado, y aspectos culturales que permiten conjeturar sobre la posible existencia de la enfermedad en época precolombina. A partir de 1988, empiezan los registros oficiales de la enfermedad, reportando mil 65 casos nuevos hasta 1994.

La enfermedad afecta principalmente a algunos tipos de trabajadores del campo, como: campesinos recolectores de guano y particularmente mineros. Ciertas actividades ocupacionales relacionadas a la espeleología, la arqueología, la antropología, la geología y la biología, también exponen a sus profesionistas en su quehacer laboral a riesgo de adquirir la histoplasmosis. Su agente etiológico es un hongo dimórfico, Histoplasma capsulatum var capsulatum, que se distribuye en la naturaleza en nichos ecológicos, donde prevalecen las condiciones propicias para su crecimiento.

La infección tiene inicio con la inhalación de microesporas (microconidios) y pequeños fragmentos de hifas, lo que asegura una alta morbilidad entre los individuos que laboran o visitan lugares cerrados. En México, este hongo ha sido encontrado en minas, cuevas, casas u otras construcciones abandonadas; asimismo, en espacios donde existe guano de murciélagos y excretas de aves, los que contienen nutrientes para su desarrollo. Los murciélagos son los mamíferos típicamente infectados y uno de los posibles reservorios del hongo en la naturaleza.

En 1992 se forma en México un grupo multidisciplionario de investigadores, que conforman varios proyectos orientados al estudio de la histoplasmosis, dando prioridad a los factores de riesgo genético y socio-económico que exponen a la población humana al mayor riesgo de infección con el agente etiológico, como: antígenos de Complejo Mayor de Histocompatibilidad (MHC) y actividades ocupacionales que facilitan un contacto estrecho entre el hongo y el individuo expuesto. Simultáneamente, se estudiaron aspectos de la biología del hongo, como la relación entre fuentes de aislamiento y la posible expresión de distintos grados de patogenicidad y de marcadores antigénicos y géneticos que pudieran diferenciar o agrupar aislamientos de distintas procedencias.

En este trabajo se presenta un estudio que relaciona las características de virulencia y polimorfismo del DNA (mediante RAPD-PCR) de cepas aisladas en México del hongo Histoplasma capsulatum.

Se aislaron cepas del hongo en México de diferentes fuentes: humano (pacientes con histoplamosis con y sin SIDA), animal (murciélago infectado) y de excretas de aves (gallo de pelea). Se trabajó con cepas de referencia de EUA, Centro y Sudamérica. Todas las cepas fueron identificadas con base a su morfología macro y microscópica, producción de exoantígenos, transformación de fase micelial a levaduriforme y estudio histopatológico. Se determinaron las características propias de cada cepa y los grados de similitud y diferencias entre ellas a través de parámetros como la virulencia, y el polimorfismo de los DNAs obtenidos de las cepas.

La macromorfología encontrada en la mayoría de las cepas fue del tipo B que corresponde a colonias cafés con aspecto pulverulento, y en la micromorfología se observaron hifas delgadas septadas con microconidios piriformes o esféricos, pedunculados o sésiles, y los macroconidios tuberculados típicos de la especie. Los exoantígenos fueron identificados por doble inmunodifusión, frente a suero del paciente con histoplasmosis y, en todos los casos, se observaron las bandas de precipitación H y M, propias de la especie. Todas las cepas revertieron a la fase levaduriforme y cuando fue necesaria la inoculación experimental, se observó la ubicación intracelular de levaduras, forma parasitaria del hongo.

Se observaron diferencias en la virulencia de las cepas, determinada por la DL50% en ratones machos, adultos, singénicos BALB/c. Destacando que la cepa del hongo EH-313 aislada de guano de murciélago ("Cueva de Juxtlahuaca" Juxtlahuaca, Gro.) y la EH-315 aislada de murciélago infectado ("Gruta de Copala", Olinalá, Gro.) procedentes de espacios cerrados en la naturaleza, son las que presentan mayor virulencia, mientras que la cepa EH-314 aislada de excretas de gallo de pelea, en espacio abierto (Olinalá, Gro.), es una de las menos virulentas. La cepa de referencia DOWNS de EUA no fue patógena para el modelo murino utilizado, esta cepa que ha sido relacionada a la histoplasmosis asociada al SIDA en EUA, es un prototipo de cepa de baja virulencia. Las cepas aisladas en México de pacientes con SIDA, presentaron virulencias heterogéneas, destacándose que la mayoría fueron catalogadas como de mediana virulencia, aunque se encontraron cepas con alta y baja virulencia.

En México hay una carencia de información sobre la epidemiología molecular de la histoplasmosis, por lo que tratamos de clasificar los aislamientos de H. capsulatum al identificar cepas similares con base en el polimorfismo de sus DNAs, mediante el uso del método de amplificación al azar del DNA polimórfico utilizando oligonucleótidos arbitrarios y la reacción en cadena de la polimerasa (RAPD-PCR); además, este análisis permite, en algunos casos, relacionar la procedencia geográfica de las cepas en la naturaleza.

El análisis del polimorfismo del DNA de las cepas estudiadas a la fecha, muestra que las cepas aisladas de la naturaleza, en México, EH-313 de guano de murciélago, EH-314 de excretas de gallo, EH-315 de murciélago infectado y EH-351 de guano de murciélago, las tres primeras de Guerrero y la última de Sinaloa, son diferentes entre sí; sin embargo, se observó similitud entre los perfiles polimórficos de las cepas aisladas de humano (HI02W) y de excretas de aves de (zanates) (L-100-91), ambas procedentes de Centroamérica (Guatemala); estos perfiles a su vez, fueron similares al de algunas cepas aisladas de pacientes con SIDA en México y a una cepa (GM) procedente de Colombia.

Por último, es pertinente comentar que los resultados acumulados sobre los diferentes parámetros estudiados, en las cepas de H. capsulatum, arrojan datos interesantes que permiten sugerir posibles clasificaciones a través de sus similitudes y asimismo, proponer ubicaciones y desplazamientos de las cepas en la naturaleza.

*Taylor María Lucía, *Reyes Montes María del Rocío, **Martínez Rivera María de los Angeles, *Duarte Escalante Esperanza y *Flores Estrada José Javier.

*Laboratorio de Inmunología de Hongos, departamento de Microbiología y Parasitología, Facultad de Medicina, UNAM. **Laboratorio de Micología Médica, departamento de Microbiología, Escuela Nacional de Ciencias Biológicas, INP.